BD流式細(xì)胞儀的檢測(cè)范圍和應(yīng)用領(lǐng)域

1.流式細(xì)胞儀可以檢測(cè)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，包括：細(xì)胞大小、細(xì)胞粒度、細(xì)胞表面面積、核漿比例、DNA含量與細(xì)胞周期、R NA 含量、蛋白質(zhì)含量。

2.流式細(xì)胞儀可以檢測(cè)細(xì)胞功能，包括：細(xì)胞表面/ 胞漿/ 核的特異性抗原、細(xì)胞活性、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、酶活性、激素結(jié)合位點(diǎn)和細(xì)胞受體。

二、BD流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用

1.流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用：流式細(xì)胞術(shù)可以檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖周期、檢測(cè)腫瘤細(xì)胞表面標(biāo)記、癌基因表達(dá)產(chǎn)物、進(jìn)行多藥耐藥性分析、檢測(cè)凋亡;2.流式細(xì)胞術(shù)在血液學(xué)中的應(yīng)用：檢測(cè)白血病和淋巴瘤細(xì)胞、活化血小板、造血干細(xì)胞(CD34+)計(jì)數(shù)、白血病與淋巴瘤的免疫分型、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè);3.流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)中的應(yīng)用：可以進(jìn)行淋巴細(xì)胞及其亞群分析、淋巴細(xì)胞免疫分型、檢測(cè)細(xì)胞因子。

三、BD流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用

主要有細(xì)胞動(dòng)力學(xué)功能研究、環(huán)境微生物分析、流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究。

四、流式細(xì)胞術(shù)常規(guī)檢測(cè)時(shí)的樣品制備

(一) 直接免疫熒光標(biāo)記法

取一定量細(xì)胞(約1 × 106 細(xì)胞/ml )，直接加入連接有熒光素的抗體進(jìn)行免疫標(biāo)記反應(yīng)(如做雙標(biāo)或多標(biāo)染色，可把幾種標(biāo)記有不同熒光素的抗體同時(shí)加入)，孵育20-60分鐘后，用PBS(pH7.2 - 7.4)洗1-2 次，加入緩沖液重懸，上機(jī)檢測(cè)。本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，易于分析，適用于同一細(xì)胞群多參數(shù)同時(shí)測(cè)定。雖然直標(biāo)抗體試劑成本較高，但減少了間接標(biāo)記法中較強(qiáng)的非特異熒光的干擾，因此更適用于臨床標(biāo)本的檢測(cè)。

(二) 間接免疫熒光標(biāo)記法

取一定量的細(xì)胞懸液(約1X106 細(xì)胞/ml )，先加入特異的*抗體，待反應(yīng)*后洗去未結(jié)合抗體，再加入熒光標(biāo)記的第二抗體，生成抗原-抗體-抗抗體復(fù)合物，以FCM檢測(cè)其上標(biāo)記的熒光素被激發(fā)后發(fā)出的熒光。本方法費(fèi)用較低，二抗應(yīng)用廣泛，多用于科研標(biāo)本的檢測(cè)。但由于二抗一般為多克隆抗體，特異性較差，非特異性熒光背景較強(qiáng)，易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以標(biāo)本制備時(shí)應(yīng)加入陰性或陽(yáng)性對(duì)照。

另外，由于間標(biāo)法步驟較多，增加了細(xì)胞的丟失，不適用測(cè)定細(xì)胞數(shù)較少的標(biāo)本。