神經干細胞利用微重力三維細胞培養系統培養方案

1. 前期準備

- 實驗材料：獲取神經干細胞（如從胚胎腦組織分離）、微重力模擬裝置、神經干細胞專用培養基（含 B27 添加劑、EGF、bFGF 的 DMEM/F12 培養基）、多聚賴氨酸包被的培養容器、無菌器械等。

- 設備準備：與腫瘤細胞培養類似，調試賽奧維度CellSpace-3D微重力三維細胞培養系統，確保溫度、氣體環境適宜。

2. 細胞分離與接種

- 細胞分離：解剖獲取胚胎腦組織，在無菌條件下剪碎，用胰蛋白酶消化后，通過機械吹打制成單細胞懸液，過濾去除組織塊，離心收集細胞。

- 接種：將神經干細胞以 2 - 3×10? 個/mL 的密度接種到微重力培養裝置中，因神經干細胞易貼壁，包被多聚賴氨酸可促進貼壁。

3. 培養過程

- 每 2 - 3 天添加適量新鮮培養基，維持營養成分。觀察細胞神經球形成情況，神經球直徑達到一定大小時，可進行傳代培養。

- 采用免疫熒光技術檢測神經干細胞標志物（如 Nestin）的表達，以鑒定細胞特性。

4. 誘導分化：培養一定時間后，可更換為含血清的分化培養基，在微重力環境下誘導神經干細胞向神經元、星形膠質細胞等分化，通過免疫細胞化學檢測相應細胞標志物（如 β - Tubulin III 用于神經元，GFAP 用于星形膠質細胞）評估分化效果。